柱層析的裝柱非常重要,裝柱的效果會(huì)直接影響層析分離效果。有濕法裝柱和干法裝柱等兩種方法。濕法裝柱很簡(jiǎn)單,使用也普遍, 就是先用比固定相多一倍的洗脫劑將固定相活成勻漿,柱子底部先用脫脂棉塞緊, 然后倒入洗脫劑將脫脂棉中氣泡趕出。
用漏斗將活好的固定相倒入柱子中, 打開(kāi)底部活塞, 將柱子中高出固定相的溶劑放出。期間不斷用橡皮棒敲打, 將固定相敲實(shí), 做到密實(shí)均勻無(wú)氣泡即可。
層析柱
很多時(shí)候用加壓的方法可以很高效地裝好柱子,而且在柱子中沒(méi)有氣泡產(chǎn)生。
干法裝柱與濕法裝柱剛好相反的是,它是將干燥的吸附劑從柱子上端直接加入到一個(gè)空的柱子中, 然后用油泵抽柱子底部, 相當(dāng)于減壓過(guò)柱, 直到柱子變得很結(jié)實(shí), 再用淋洗劑“走柱子” 。
干法裝柱的一個(gè)缺點(diǎn)就是在裝入洗脫劑后, 由于溶劑和固定相之間的吸附放熱, 所以柱子容易變花,影響分離效果。
解決的方法是:
(1)固定相一定要添加結(jié)實(shí);
(2)一定要用較多的溶劑“走柱子”,直到柱子的下端不再發(fā)燙, 恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。無(wú)論使用哪種方法裝柱,最后都要求所裝的柱子結(jié)實(shí)、勻稱(chēng)、無(wú)氣泡。
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